一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康囊?br />
1、進(jìn)一步加強(qiáng)學(xué)習(xí)、掌握玻璃瓶、試劑瓶的清洗、烘干、包扎的包扎技術(shù)。
2、為下一次的玻璃瓶、試劑瓶_的準(zhǔn)備工作。
二、原理
為確保實(shí)驗(yàn)順利地進(jìn)行，要求把實(shí)驗(yàn)所用的玻璃瓶清洗干凈。為保持_后和無(wú)菌狀態(tài)，需要對(duì)培養(yǎng)皿、吸管等進(jìn)行包扎，對(duì)試管和三角瓶等加塞棉塞。這些工作看起來(lái)很普通簡(jiǎn)單，但如操作不當(dāng)或不安操作規(guī)定去做，則會(huì)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果，甚至?xí)?dǎo)致試驗(yàn)的失敗。
_原理：高壓蒸汽_是將待_的物品放在一個(gè)密閉的加壓_鍋內(nèi)，通過(guò)加熱，使_鍋隔套間的水沸騰而產(chǎn)生蒸汽。待水蒸汽急劇地將鍋內(nèi)的冷空氣從排氣閥中驅(qū)盡，然后關(guān)閉排氣閥，繼續(xù)加熱，此時(shí)由于蒸汽不能溢出，而增加了_器內(nèi)的壓力，從而使沸點(diǎn)增高，得到高于100℃的溫度。導(dǎo)致菌體蛋白質(zhì)凝固變性而達(dá)到_的目的。適用于一般培養(yǎng)基、玻璃瓶、試劑瓶、無(wú)菌水、金屬用具。一般培養(yǎng)基在121．3℃_20分鐘即可。干熱_是利用高溫使微生物細(xì)胞內(nèi)的蛋白質(zhì)凝固變性而達(dá)到_的目的。細(xì)胞內(nèi)的蛋白質(zhì)凝固性與其本身的含水量有關(guān)，在菌體受熱時(shí)，當(dāng)環(huán)境和細(xì)胞內(nèi)含水量越大，則蛋白質(zhì)凝固_越快，反之含水量越小，凝固緩慢。因此，與濕熱_相比，干熱_所需溫度高（160—170℃），時(shí)間長(zhǎng)（1—2小時(shí)）。但干熱_溫度不能_180℃，否則，包器皿的紙或棉塞_會(huì)烤焦，甚至引起燃燒，因而一般塑料制品不能用干熱_。
三、試劑瓶和儀器
?。ㄒ唬﹥x器
高壓蒸汽_鍋、電熱烘箱、試管、三角瓶、培養(yǎng)皿和吸管、棉線、紗布、棉花、牛皮紙、報(bào)紙、硅膠塞等
四、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容
?。ㄒ唬┎Ａ?、試劑瓶的清洗：
新購(gòu)的玻璃器皿的洗滌
將器皿放入２％鹽酸溶液中浸泡數(shù)小時(shí)，以除去游離的堿性物質(zhì)，_后用流水沖凈。
對(duì)容量較大的器皿，如大燒瓶、量筒等，洗凈后注入濃鹽酸少許，轉(zhuǎn)動(dòng)容器使其內(nèi)部表面均沾有鹽酸，數(shù)分鐘后傾去鹽酸，再以流水沖凈，倒置于洗滌架上晾干，即可使用。
常用舊玻璃器皿的洗滌
確實(shí)無(wú)病原菌或未被帶菌物污染的器皿，使用前后，可按常規(guī)用洗衣粉水進(jìn)行刷洗；
吸取過(guò)化學(xué)試劑的吸管，先浸泡于清水中，待到_數(shù)量后再集中進(jìn)行清洗。
帶菌玻璃器皿的洗滌
凡實(shí)驗(yàn)室用過(guò)的菌種以及帶有活菌的各種玻璃器皿，_經(jīng)過(guò)高溫_或消毒后才能進(jìn)行刷洗：
1、帶菌培養(yǎng)皿、試管、三角瓶等物品，做完實(shí)驗(yàn)后放入消毒桶內(nèi)，用0.1MPa_20～30min后再刷洗。含菌培養(yǎng)皿的_，底蓋要分開放入不同的桶中，再進(jìn)行高壓_。
2、帶菌的吸管、滴管，使用后不得放在桌子上，立即分別放入盛有3～5%來(lái)蘇爾或5%石炭酸或0.25%新潔爾滅溶液的玻璃缸（筒）內(nèi)消毒24h后，再經(jīng)0.1MPa_20min后，取出沖洗。
3、帶菌載玻片及蓋玻片，使用后不得放在桌子上，立即分別放入盛有3～5%來(lái)蘇爾或5%石炭酸或0.25%新潔爾滅溶液的玻璃缸（筒）內(nèi)消毒24h后，用夾子取出經(jīng)清水沖干凈。
如用于細(xì)菌染色的載玻片，要放入50g/L肥皂水中煮沸10min，然后用肥皂水洗，再用清水洗干凈。
_后將載玻片浸入95%酒精中片刻，取出用軟布擦干，或晾干，保存?zhèn)溆谩?br />
若用皂液不能洗凈的器皿，可用洗液浸泡適當(dāng)時(shí)間后再用清水洗凈。
4、含油脂帶菌器材的清洗
單獨(dú)高壓_：用0.1MPa_20～30min→趁熱倒去污物→倒放在鋪有吸水紙的籃子上→用100℃烘烤0.5h→用5%的碳酸氫鈉水煮兩次→再用肥皂水刷洗干凈。
?。ǘ?、玻璃瓶、試劑瓶的晾干或烘干
不急用的玻璃瓶：可放在實(shí)驗(yàn)室中自然晾干；
急用的玻璃器瓶：把器材放在托盤中（大件的器材可直接放入烘箱中），再放入烘箱內(nèi)，用80～120℃烘干，當(dāng)溫度下降到60℃以下再打開取出器材使用。
?。ㄈ┎Ａ康陌?br />
要_后的玻璃瓶仍保持無(wú)菌狀態(tài)，需在_前進(jìn)行包扎。
（1）培養(yǎng)皿：洗凈的培養(yǎng)皿烘干后每10套（或根據(jù)需要而定）疊在一起，用牢固的紙卷成一筒，或裝入特制的鐵桶中，然后進(jìn)行_。
（2）吸管：洗凈、烘干后的吸管，在吸口的一頭塞入少許脫脂棉花，以防在使用時(shí)造成污染。塞入的棉花量要適宜，多余的棉花可用酒精燈火焰燒掉。每支吸管用一條寬約4~5cm的紙條，以30~50℃的角度螺旋形卷起來(lái)，吸管的_在頭部，另一端用剩余的紙條打成一結(jié)，以防散開，標(biāo)上容量，若干支吸管包扎成一束進(jìn)行_。使用時(shí)，從吸管中間擰斷紙條，抽出試管。
?。?）試管和三角瓶：試管和三角瓶都需要做合適的棉塞，棉塞可起過(guò)濾作用，避免空氣中的微生物進(jìn)入容器。制作棉塞時(shí)，要求棉花緊貼玻璃壁，沒有皺紋和縫隙，松緊適宜。過(guò)緊易擠破管口和不易塞入；過(guò)松易掉落和污染。棉塞的長(zhǎng)度不小于管口直徑的2倍，約2/3塞進(jìn)管口。
目前，國(guó)內(nèi)已開始采用塑料試管塞，可根據(jù)所用的試管的規(guī)格和試驗(yàn)要求來(lái)選擇和采用合適的塑料試管塞。
若干支試管用繩扎在一起，在棉花部分外包裹油紙或牛皮紙，再用繩扎緊。三角瓶加棉塞后單個(gè)用油紙包扎。
?。ㄋ模?、玻璃瓶、試劑瓶的_
_:干熱_:160～165℃烘箱中_2h；或濕熱_:121℃20～30min
u干熱_法
1、將包扎好的玻璃瓶擺入電熱烘箱中，相互間要留有_的空隙，以便空氣流通。
2、關(guān)緊箱門，打開排氣孔，接上電源。
3、待箱內(nèi)空氣排出到_程度時(shí)，關(guān)閉上排氣孔，加熱至_溫度后，固定溫度進(jìn)行_：160℃—165℃保持2小時(shí)。2小時(shí)后切斷電源。
4、待烘箱內(nèi)溫度自然降溫冷卻到60℃以下后，再開門取出玻璃器皿，避免由于溫度突然下降而引起玻璃瓶碎裂。
高壓蒸汽_法
1、關(guān)好排水閥門，放入純凈水或蒸餾水至標(biāo)度。注意水量_要加足，否則容易造成事故。
2、將須要_的玻璃瓶、培養(yǎng)基等裝入_鍋中，加蓋密封。旋緊螺旋時(shí)，先將每個(gè)螺旋旋轉(zhuǎn)到_程度（不要太緊），然后再旋緊相對(duì)的兩個(gè)螺旋，以達(dá)到平衡旋緊，否則易造成漏氣，達(dá)不到__的目的。
3、通電加溫，打開排氣活門，排盡鍋內(nèi)的空氣。通常當(dāng)壓力表指針升至5磅或0.05MPa時(shí)，打開排氣活門放氣，待壓力表指針降至零點(diǎn)一小段時(shí)間后，再關(guān)閉活門。即活門沖出的全部是蒸汽時(shí)則表示_，此時(shí)可關(guān)閉排氣活門，如果過(guò)早關(guān)閉活門，排氣不_，也達(dá)不到__的目的。
4、恒溫_:0.1MPa或15磅壓力保持20～30分鐘。壓力表的指針上升時(shí)，鍋內(nèi)溫度也逐漸升高，當(dāng)壓力表指針升至0.1MPa時(shí)或15磅時(shí)，鍋內(nèi)溫度相當(dāng)于120℃～121℃（等于一個(gè)大氣壓），此時(shí)開始計(jì)算_時(shí)間，控制熱源，使處于0.1MPa或15磅壓力保持20～30分鐘，即能達(dá)到__的目的，然后停止加溫。當(dāng)達(dá)到所需溫度時(shí)開始計(jì)時(shí)，并在此溫度下保持所需的時(shí)間。
5、降溫：自然降溫或打開活門排汽降溫。稍微打開一點(diǎn)排氣活門，使鍋內(nèi)蒸汽緩慢排除，然后逐漸開大活門，氣壓徐徐下降，注意勿使排氣過(guò)快，否則會(huì)使鍋內(nèi)的培養(yǎng)基沸騰而沖脫或沾染棉花塞，但排氣太慢又使玻璃瓶在鍋內(nèi)，受高溫處理時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，對(duì)玻璃瓶也是不利的。一般從排氣到打開鍋蓋以10分鐘左右為好。
6、當(dāng)鍋內(nèi)蒸汽_排盡時(shí)即壓力表指針降到零時(shí)，要立即打開鍋蓋。
7、取出玻璃瓶：當(dāng)鍋內(nèi)溫度下降到60℃左右時(shí)器材或培養(yǎng)基。如玻璃瓶需制備固體斜面培養(yǎng)基時(shí)，則應(yīng)趁熱將試管斜放在桌上，上面蓋上報(bào)紙以免落灰塵，冷卻后便可收起。
8、_后將高壓_器內(nèi)的剩余水排出。
9、觀察_效果。把_玻璃瓶入25℃溫箱中，培養(yǎng)48小時(shí)觀察_效果。48小時(shí)后不見雜菌生出，便證明玻璃瓶已達(dá)到_目的，可以使用。
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